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UV1901PC紫外分光光度計測多巴胺含量

UV1901PC紫外分光光度計測多巴胺含量的原理是根據多巴胺與亞硝酸鈉在pH5.90時的反應產物在300nm處有zui大吸收,多巴胺質量濃度在0~10LgPmL范圍內與吸光度之間遵從朗伯比爾定律,表觀摩爾吸光系數為1.85@104L#mol-1#cm-1,檢測限為0.1LgPmL。

多巴胺是一種神經傳遞物質,在體內是合成去甲腎上腺素的直接前體,具有重要的生理作用。作為藥物,能增強心肌收縮力,對內臟血管有擴張作用,增加血流量,有利于改善休克時重要臟器的血

液供應,適用于感染性、心源性、失血性休克以及心臟停搏時起搏升壓。

因多巴胺與四氯苯醌之間的荷移反應,用UV1901PC紫外分光光度計測定針劑中的多巴胺從甜馬鈴薯中提取多酚氧化酶,將多巴胺氧化為相應多巴胺色素,建立了測定藥劑中多巴胺的分光光度法,但操作繁雜。本研究依據多巴胺與亞硝酸鈉在水介質中即可生成有較高吸光度產物的反應,建立了測定多巴胺注射液中多巴胺含量的分光光度法。該法操作簡便,靈敏迅速,有寬的線性范圍,與英國藥典規定的液相色譜法對照,結果吻合。

1實驗部分

1.1儀器

UV1901PC紫外分光光度計(上海奧析);

UV1901PC紫外分光光度計采用濱松無臭氧環保型氘燈，普通長壽命氘燈會有臭氧產生，長期吸入對身體有害，無臭氧長壽命氘燈就可以有效避免。UV1901PC紫外分光光度計還采用德國歐士朗鎢燈，美國派來芝檢測器，雙光束光學系統，加厚光學底板，更能保證儀器的穩定性。操作界面和操作系統都是簡便快捷版的，減少了檢測時間的同時，增加準確性.吸光度可以到小數點后四位。可選配多種附件，自動四聯池，七聯池，恒溫裝置，透過率固體架，反射率固體架等。

UV1901PC紫外分光光度計的顯示方式：6英寸 320×240 點陣帶背光數字 LCD

光源燈：預調日本濱松無臭氧環保型氘燈 歐司朗長壽命鹵鎢燈

光學系統：精密雙光束光學系統

接口：RS232C串行通訊口用于接配軟件，并行打印口用于接配打印機

光譜掃描功能：主機及軟件支持

電源電壓：100V～240V   50/60±1Hz

儀器尺寸：650×450×220（mm）

凈重：25Kg

特點

UV1901PC紫外分光光度計的光學系統設計和電路控制系統設計十分嚴謹,元器件的選用控制嚴格,具有高標準的準確度、重復性、低噪聲和低雜散光指標，線性范圍和穩定性指標也十分出色。有1nm和2nm帶寬兩種配置適合不同用戶選擇，大屏幕LCD顯示，具高測量精度和穩定性，是一款高品質的儀器。

UV1901PC紫外分光光度計使用日本濱松無臭氧環保型氘燈，使用壽命達到2000小時，光輸出可保持穩定直至其使用壽命，替換極為方便。

UV1901PC紫外分光光度計提供2種操作模式：主機測量模式或軟件控制測量模式。

內建的SCM技術和定性定量分析軟件能實現數據采集與處理、光譜測量、動力學測量、定量分析、DNA測定和光譜掃描等擴展功能。菜單下拉式分析軟件易于操作。

UV1901PC紫外分光光度計具有開放式的樣品室，可選配反射樣品架、固體樣品架、恒溫水浴和自動進樣器等適合于不同的應用。

單機掃描曲線可以存儲9條，工作曲線可以存儲9條。聯機模式儲存數量不限。

pHS-3C型酸度計(上海雷磁儀器廠)。

多巴胺標準儲備液100LgPmL(化學對照品,中國藥品生物制品檢定所),準確稱取0.01g多巴胺,用二次水稀釋至100mL,4e儲存,用時稀釋為40LgPmL的工作液。NaNO2(10gPL)水溶液,避光保存。HAc-NaAc緩沖溶液(pH5.90),0.1molPLHAc和0.1molPLNaAc以1B16的體積比混合。

所用試劑均為分析純,實驗用水均為二次水。

1.2實驗方法

準確移取40LgPmL的多巴胺標準液2mL于10mL比色管中,加NaNO2溶液2mL,HAc-NaAc緩沖溶液5mL,搖勻,置于沸水浴中加熱3.5min。取出用流水冷卻至室溫,用水稀釋至刻度,搖勻。以試劑空白為參比,用1cm比色皿在300nm處測量其吸光度。

2結果與討論

2.1吸收光譜

按實驗方法配制溶液后,在分光光度計上,以試劑空白為參比掃描溶液的吸光度,得到吸收光譜如圖1所示。由圖可見,反應產物Kmax=300nm。NaNO2的Kmax為356nm;多巴胺的Kmax為279nm。

2.2反應影響因素研究

2.1加熱時間影響

多巴胺在加熱不同時間后的吸光度,結果表明加熱時間為3~4min時,吸光度zui大。所以選擇加熱時間為3.5min。

2.2pH的影響按實驗方法測量不同pH值時溶液的吸光度,

結果如圖2所示。

圖1圖2

由圖可見,pH5.9時,溶液的吸光度zui大。所以選擇pH5.9的HAc-NaAc緩沖溶液,但要嚴格控制pH值,每次加入緩沖溶液510mL。

2.3試劑用量影響按照實驗方法,保持多巴胺濃度不變,逐步增大NaNO2(10gPL)的加入量,測定溶液的吸光度。結果發現,隨著NaNO2加入量的增大,溶液的吸光度逐漸增大;當加入量\1.5mL時,溶液的吸光度基本不變,所以確定*加入量為2mL。

2.4試劑加入順序影響按照實驗方法,依照不同順序加入試劑,測量溶液的吸光度,結果表明試劑加入的*順序為先加NaNO2后加HAc-NaAc緩沖溶液。

2.2.5產物的穩定性按照實驗方法,測定放置不同時間后溶液的吸光度,結果表明,放置時間在90min之內溶液的吸光度基本不變,產物比較穩定。

2.3選擇性

按照實驗方法,研究4LgPmL多巴胺水溶液中各種外來常見離子對體系的影響,控制測定誤差在5%以內,下列離子的允許存在量(LgPmL)為:K+(30)、Mg2+(25)、Cu2+(25)、Pb2+(10)、Cl-(60)、Ca2+(10)、Zn2+(100)、HPO42-(10)、PO43-(6)、SO42-(300)

2.4方法特性

2.4.1標準曲線按實驗方法配制多巴胺的標準系列,分別測定其吸光度,實驗表明多巴胺的濃度在0~10LgPmL范圍內與吸光度呈線性關系,線性回歸方程為:A=010436c+0100591,r=0.9978。

2.4.2檢測限平行測定試劑空白的吸光度,按照空白加3倍標準偏差所對應的濃度,檢測限為0.1LgPmL。

2.4.3精密度按照實驗方法將同一樣品測定10次,多巴胺的平均質量濃度為2.0LgPmL,相對標準偏差為5.3%。

2.5樣品分析

2.5.1多巴胺注射液樣品分析多巴胺的注射液

用二次水稀釋至不同濃度,作為樣品溶液進行檢測。結果見表1。從表可看出,用分光光度法測定

所得結果與用HPLC法相符,在置信度等于95%,用Cochran檢驗兩種方法間不存在顯著性差異。

表1樣品的測定

5.2回收率按實驗方法,測定多巴胺注射液的回收率,結果如表2所示。

表2

結論

本文建立了用分光光度法測定多巴胺注射液中多巴胺的方法,該法操作簡單,檢出限低,線性范圍較寬。